human TIGIT及其配体PVR的真核表达及纯化文献综述

一、课题目的在体外正确表达Human TIGIT及其配体PVR，为进一步的在体外研究蛋白功能及抗体的筛选提供实验材料。

二、研究内容将Human TIGIT及其配体PVR的质粒瞬转到细胞中，并纯化表达的蛋白，对收集到的蛋白进行鉴定。

后将Human TIGIT蛋白送至QC部门检测活性，将PVR蛋白通过流式细胞术检测与TIGIT的相互作用。

三、研究手段1.使用媒介PEI，将Human TIGIT和PVR瞬转到293F细胞中，之后进行补液、纯化表达的蛋白；2.使用仪器AKTA，对蛋白进行亲和层析；3.对收集到的蛋白进行浓缩、换液、跑胶鉴定；4.将收集到的Human TIGIT蛋白送去公司QC部门检测其活性；5.通过流式细胞术检测PVR蛋白与公司已构建的TIGIT细胞株之间的相互作用。

四、主要成果形式纯化后的具有活性的Human TIGIT及其配体PVR蛋白。

五、主要参考文献[1] 毕嘉成. NK细胞抑制性受体TIGIT的功能研究[D]. 中国科学技术大学, 2014.[2] 张章, 董光龙, 张赟, et al. CD155在结肠癌组织和细胞系中的表达及临床意义[C]// 全军实验外科联合学术会议. 2008.[3] 尹晓婉, 刘婷婷, 张子宁, et al. HIV感染者CD4~ T细胞TIGIT受体及其配体CD155表达情况研究[J]. 免疫学杂志, 2017(11):71-76.[4] 张章. NK细胞活化性受体配体在结肠癌细胞的表达与NK细胞杀伤敏感性的关系[D]. 第四军医大学, 2008.[5] 赵秀平. Tigit信号通路对小鼠皮肤移植的保护作用及机制研究[D]. 2017.[6] 张清, 毕嘉成, 魏海明, et al. TIGIT阻断性单克隆抗体的抗肿瘤免疫治疗与效应机制探究[C]// 第十四届全国肿瘤生物治疗大会论文集. 2015.[7] 王蔚, 高丽, 王新荣, et al. 表观遗传学调控急性B淋巴白血病细胞系表面脊髓灰质炎病毒受体表达[J]. 中国实验血液学杂志, 2011, 19(6).[8] 张葵, 陈丽华, 贾卫, et al. 接触抑制下调CD112和CD155在ECV304细胞上的表达伴有对NK细胞杀伤的抵抗[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2007, 23(9).[9] 邓虎平. 人可溶型CD155分子产生机制的研究[D]. 第四军医大学, 2007.[10] 崔建健. 协同共抑制分子TIGIT在人原发性肝癌中的表达调控及临床意义[D]. 2018.[11] 何文涛, 陈茜, 余学锋. 共抑制分子TIGIT的研究进展[J]. 现代免疫学, 2014(5):436-438.[12] 张清. 抑制性受体TIGIT对NK细胞介导的抗肿瘤免疫的影响[D]. 2018.[13] 何雨珂. 抑制性受体TIGIT对NK细胞教育的调控作用[D]. 2017.[14] 张章, 董光龙, 张赟, et al. CD155在结肠癌组织和细胞系中的表达及临床意义[C]// 全军实验外科联合学术会议. 2008.[15] Yuke H , Hui P , Rui S , et al. Inhibitory receptor TIGIT contributes to NK cell education in an MHC-I-independent manner[C]// 第十一届全国免疫学学术大会分会场交流报告集. 2016.[16] 张清, 毕嘉成, 孙汭, et al. TIGIT阻断对肿瘤发展和NK细胞耗竭的影响及机制探究[C]// 第十一届全国免疫学学术大会分会场交流报告集. 2016.六、工作进度2019.03.04-2019.03.08 瞬转Human TIGIT 及其配体PVR2019.03.11-2019.03.15 纯化Human TIGIT 及其配体PVR2019.03.18-2019.03.22 对Human TIGIT 进行浓缩，对Human TIGIT 及其PVR进行换液、跑胶鉴定2019.03.25-2019.03.29 送检Human TIGIT,通过流式检测TIGIT与PVR之间的相互作用。

七、文献综述ＮＫ细胞是除却Ｔ、Ｂ细胞外，机体中的又一类重要淋巴细胞，它无需抗原刺激和活化即可快速应答，可通过分泌粒酶Ｂ和穿孔素对靶细胞进行直接杀伤，且能分泌多种细胞因子及趋化因子，在抗肿瘤、抗病毒感染中起到不可或缺的作用。

虽然NK细胞行使重要的免疫监视功能，但在一些情形下NK细胞的过度活化会导致不必要的组织损伤、甚至危及生命，因而，机体需要通过某种方式维持NK细胞的活性，使之处于可控的范围内，从而维持细胞对自身的耐受。

与T、B细胞的免疫耐受相比较，维持NK细胞对自身耐受的研究较少，目前认为可以通过抑制性受体介导的方式或活化后诱导的细胞凋亡来实现，而抑制性受体在NK细胞与辅助细胞之间相互作用的过程中发挥重要的调控功能。