开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
背景:
炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的复杂的防御反应。随着研究的进展,发现慢性炎症和感染是肿瘤发生的一个重要的原因。炎症致癌的作用,主要通过一些炎症因子作为媒介,其中大量的氮类和活性氧,炎性细胞因子和趋化因子的异常表达,增加环氧合酶-2和核因子NF-kappa;B等因素是引起癌变的有利条件。这些因子相互作用,促进肿瘤的发生和发展。炎症因子在肿瘤生物治疗中的作用已受到国内外学者的广泛关注。通过可致癌的各种炎症因子的受体拮抗剂、抑制剂、中和体以及炎症因子修饰物来阻断异常的信号转导通路,应该可在一定程度上阻止肿瘤的发生及阻断其浸润转移。炎症因子及其受体的应用有望成为新的肿瘤治疗策略与手段。
研究方法:
1.细胞培养
人类结肠癌细胞HCT-116和人类急性单核造血细胞THP-1来自CBCAS,它们在McCoys和RPMI-1640培养基中培养。分别加10%胎牛血清,100u/ml苄基青霉素和100mu;g/ml链霉素,并在通有5%CO2,37℃的人工孵箱中培养。
2.四甲基偶氮唑盐(MTT)法
将处于对数生长期细胞用0.02%胰酶消化,制成细胞悬液,以1105/ml细胞浓度加入96孔酶标板内,每孔100mu;l,设五副孔,置37℃5%CO2孵箱内培养24h左右,再分别给予不同剂量的VI-14100ml/孔,孵育24hr后,每孔加入5mg/kgMTT溶液20ml,继续培养4hr,弃去全部上清,加入DMSO100ml/孔,微型振荡器上振动5分钟,使结晶完全溶解,于酶联仪570nm波长处测定吸光度值(A),A值越高活细胞数也越多。根据A可计算药物对细胞的生长抑制率。
3.Westernblot
Westernblot利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)将蛋白分离,再将蛋白从凝胶中转移至硝酸纤维素膜上,通过加入一抗,二抗,并经扫描,最终将蛋白的表达半定量的显示出来。以此来判断蛋白的表达趋势。
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