肝素寡糖的制备及其对PTCA术后种兔血液指标的影响文献综述

一、课题背景

肝素 (heparin)是广泛存在于动物器官和组织(如小肠粘膜、肺等)中的一种葡糖胺聚糖，抗凝血药物，普通肝素的相对分子质量( Mr) 为3 000 ～ 30 000，平均15 000。具有抗凝、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌、调血脂等多种生物学功能，但长期使用会有许多负面影响，如出血和诱导血小板减少, 脂质代谢异常及骨质疏松等副作用，临床应用中需要实验室监测，这在一定程度上限制了其临床应用。肝素的糖链结构和其他多糖一样,糖苷键能在强酸条件下水解。肝素由特殊的单糖组成，如氨基葡萄糖和艾杜糖醛酸，可以被亚硝酸、过氧化氧、高碘酸和肝素酶降解，这也是制备低分子量肝素的常用方法。另外,肝素上的硫酸基团在酸性和碱性

条件下都不太稳定,氨基葡萄糖上的N-硫酸基团，在酸性条件下很容易脱去，温度越高越容易失去硫酸基，从而失活。在碱性条件下，N-硫酸较稳定，但是艾杜糖醛酸上的2-O-硫酸基团对碱较敏感，容易脱去，也会使肝素失去活性。低分子量肝素(low molecular weight heparins, LMWH，平均Mr3 000 ～ 7 000)是分离普通肝素得到的一些组分或裂解后产生的片段．这类物质分子量低，结构也较单一．它是近10年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物，其抗血栓作用优于肝素，而抗凝血作用却低于肝素，其具有生物利用度高，体内半衰期长，出血倾向小，口服易吸收等特点，因而受到更多的关注。

LMWH 的制备方法主要有化学解聚法、物理制备法、生物解聚法和合成制备法。不同的制备方法获得的LMWH 的Mr和生物活性存在差异，相互之间不能替代使用。物理分离法的主要方法有:有机溶剂沉淀法、凝胶过滤法、亲和层析法、离子交换层析法和超滤法，其中以亲和层析最为重要。物理分离法制备的LMWH大多用于结构测定及生物活性的研究。物理分离法具有不改变原料结构，保留较高生物活性的特点，但由于低分子成分在未分级肝素（unfractionated heparin, UFH）中的含量较低，物理分离法收率低，不适宜工业化生产。化学解聚法主要是通过解聚作用制备低分子肝素，主要方法有亚硝酸解聚法、碱解聚法、过氧化物解聚法、臭氧解聚法和光化学解聚法。酸-亚硝酸盐解聚法是研究最多的一种酸盐结合的降解方法，其中NaNO2是最常见的解聚剂，其在酸性溶液中具有强氧化性。将多糖溶于一定浓度的稀乙酸溶液中，再缓慢滴入一定量的NaNO2溶液于室温反应一定时间，使之发生重氮化反应，脱去一分子的N2，引起分子内重排，使多糖中的糖苷键断裂，最后用NaOH 调节pH 至7.0 终止反应。在反应过程中,通过控制酸碱度,亚硝酸的量,反应时间和温度等,来控制生成的肝素的的分子量。亚硝酸解聚法已被广泛用于LMWH 的生产中。

二、实验内容

第一阶段：亚硝酸钠裂解法制备肝素寡糖

1、 试剂与材料: 肝素钠、1%醋酸、亚硝酸钠、无水乙醇、丙酮、5M氢氧化钠等。

2、 仪器：精密pH计、磁力搅拌器、精密电子天平、离心机等。

3、操作步骤：