谷丙转氨酶活力测定实验中底物溶液储存控制文献综述

一：选题背景及意义氨基酸转移酶是人体内一类重要的酶，其重要分布在各种脏器中，正常血清中含量较低，在众多氨基酸转移酶中，谷丙转氨酶在肝脏中含量最高，当某些药物对肝脏造成损害或者在肝炎的急性阶段，由于肝细胞损坏，该酶进入血液，可使血清中谷丙转氨酶含量明显升高，因此测定谷丙转氨酶的活力可作为药物亚急性中毒及肝脏病变的重要指标之一，谷丙转氨酶能催化丙氨酸脱氨基转移给alpha;酮戊二酸，同时生成谷氨酸和丙酮酸，丙酮酸在酸性条件下与2，4二硝基苯肼可缩合成丙酮酸二硝基苯腙，该腙在碱性条件下呈现出橙红色，通过使用可见光分光光度法在一定波长测定溶液的吸光度，可得到酶促反应中生成的丙酮酸的量，我们将1ml血清在37摄氏度与底物反应30分钟，每生成2.5mu;g丙酮酸所需的酶量称为一个SALT单位，通过上述丙酮酸含量的测定，可以计算出血清中的酶活力在中国药科大学生物化学学科本科实验中，开设了观察血清中谷丙转氨酶的活力变化实验，利用上述原理，通过测定一定时间内酶促反应生成的丙酮酸含量，可测定酶活力，但是在该实验所用到的试剂中，需要使用到酶促反应底物溶液，准备室老师需要提前准备谷丙转氨酶底物溶液，该溶液配置方法如下：准确称取alpha;酮戊二酸87.6mg，dl丙氨酸5.34g，先用90ml0.1mol/LpH7.4的磷酸缓冲溶液溶解，然后用20%氢氧化钠溶液调制ph7.4，再以上述磷酸缓冲稀释液稀释至300ml，即可得到需要的溶液，在得到溶液后，向其中加入少量氯仿，可延长其保存时间。

该氨基酸酮酸混合溶液需要置于4℃冰箱保存，但是由于溶液配置环境无法做到无菌，氨基酸溶液自身易变质等因素，该溶液存在保存时间短，容易变质的问题，在加入三氯甲烷且低温条件下也仅可保存一周左右的时间，需要实验老师经常配制该溶液，带来了工作量的提升，也产生了试剂的浪费。

同时三氯甲烷（又称作氯仿）作为一种有机试剂，是一种刺激性极强，致癌的物质，而且其对于环境特别是水体有较强破坏作用，因此本课题意在通过实验的基础上，探究该底物溶液的变质情况以及能够延长储存期，降低工作量，降低浪费，降低实验毒性的方法。

二研究内容预先按上述配置方法（除最后不加入三氯甲烷外）配置SALT底物溶液含300ml，等量分置于不同容器中储存，分别在25℃室温，4℃冰箱，低温冷冻保存，在1，3，5，7，10，15日时，对于储存的底物溶液进行分析，首先我们将对其氨基酸含量进行测定。

测定原理如下：铜离子能与氨基酸中的氨基和羧基形成五元环状络合物，绝大多数氨基酸与其进行反应产物为蓝绿色，在一定波长下颜色的深浅与氨基酸总含量成正比，故可以用可见分光光度计测定其吸光度，进而换算得到氨基酸总含量。

采用氨基酸测定试剂盒可实现对于溶液中氨基酸含量快速而准确的测定，我们也将对试剂盒进行准确性、回收率、精密度等多方面考察，以确保实验结果的准确性，通过试剂盒，我们可以得到溶液中氨基酸含量，进而可分析得到该底物溶液变质程度。

其次我们将储存不同期限的SALT底物溶液恢复至室温后，进行谷丙转氨酶的活力的测定实验，来考察不同储存时限的底物溶液对于该实验的影响程度。

通过上述实验，我们可对该底物溶液保存及变质情况有了初步了解，经过储存的底物溶液会对酶活力测定实验产生较大影响，针对底物溶液变质，储存时间段的问题，我们拟采用进行添加防腐剂或抗生素类物质至底物溶液中，以达到提高实验效率，减少工作量，降低试剂损耗的目的。

通过查阅相关资料及产品使用说明，我们可选择几种适合于当前实验条件下的防腐剂（食品添加剂），我们对需要的防腐剂有以下几个要求：1该产品在本次实验条件下（ph7.4，37℃水溶液）应具有一定的溶解度2在本次实验条件下应抑菌（抗菌）性能较好。