SVF细胞分离提取条件优化研究文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

1. 研究背景

脂肪组织具有代谢和调控作用以及较高的再生潜能，且可通过吸脂术轻松获得。正是由于这些特性，脂肪组织正逐渐成为更具潜力的干细胞来源应用于组织工程和再生医学中。除去脂肪组织中的成熟组织细胞、结缔组织和来自脂肪抽吸物的血液杂质后，即得到基质血管组分（stromal vascular fraction，SVF）。SVF为一种异质细胞群，包括内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、淋巴细胞以及大量间充质干细胞等 10余种细胞，但不含脂肪细胞，SVF在体内环境下能够分化为成熟脂肪细胞，促进宿主干细胞向受区的定向迁移，部分参与了构成新生血管内皮细胞，有助于移植脂肪组织早期供血的建立。SVF 含有的多种细胞类型使其具有强大的免疫调节、血管新生和组织重建等再生潜能。由于SVF无需体外扩增而含有干细胞，因此被视为细胞再生的理想材料。此外，SVF中还可直接分离出脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs），ADSCs作为脂肪组织的储备可直接分化为脂肪细胞，从SVF中直接分离得到ADSCs相对更加安全，因此在临床中得到了更广泛的应用。

目前制备SVF常用的方法包括酶消化法和机械消化法。

酶消化法指用含有胶原酶的缓冲液在37 ℃环境下消化脂肪，大致过程如下：37℃环境中按适当比例混合脂肪组织和酶后震荡消化1h左右，然后加入等量完全培养基终止消化，离心后弃去上清并加入磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS），洗涤后用特定孔径滤网过滤即得到SVF悬液。但由于各个实验室在进行消化过程中所采用的酶浓度、离心浓度、消化时间、滤孔网径等实验条件的不同，导致最后分离得到的SVF活性、产率、表型等均有一定差异。由此可见，实验条件对最后分离得到的SVF的各项结果有重要影响。

机械消化法过程中均不涉及使用异种蛋白酶。包括采用血清消化、机械振荡或推注剪切等方法来处理脂肪组织。若使用机械振荡法，得到的SVF中干细胞较酶消化法所得到的细胞活性更高，但消化过程耗时较长，且得到的细胞总量不高。Tonnard等通过在注射器间反复推注脂肪来乳化脂肪组织，离心后得到纳米脂肪胶状物，此方法操作简单但所得到的细胞活性较低。机械消化法安全性较高，但处理后的细胞得率和活性均不够理想。

1. 研究方法

在酶消化法的基础上，通过改变单一实验条件，观察对分离得到SVF细胞数量的影响。

不同浓度的Ⅰ型胶原酶对获取SVF数量的影响：

收集抽脂术患者的脂肪组织，等量分装至多个离心管中，分别加入等体积等浓度梯度的Ⅰ型胶原酶消化液，混匀。恒温水浴中消化一段时间后，加入等体积完全培养液终止消化，尼龙网过滤，滤过物离心后弃去上清，完全培养液重悬细胞。加入红细胞裂解液，室温下孵育后离心，细胞沉淀中加入完全培养液混匀后尼龙网过滤，用细胞计数板计数细胞总量。

不同消化时间对获取SVF数量的影响：

收集抽脂术患者的脂肪组织，等量分装至多个离心管中，分别加入等体积等浓度的Ⅰ型胶原酶消化液，混匀。恒温水浴消化一段时间后，尼龙网过滤，过滤物离心后弃去上清，完全培养液重悬细胞。加入红细胞裂解液，室温下孵育后离心，细胞沉淀中加入完全培养液混匀后尼龙网过滤，用细胞计数板计数细胞总量。