基于Stease A催化的抗CD20抗体和MMAE偶联药物及其体外活性测定文献综述

一、研究主要内容 1、从大肠杆菌中克隆出Sortase A的基因并利用基因工程表达纯化此蛋白 2、利用纯化的Sortase A催化抗CD20抗体OFA与小分子MMAE偶联并测其体外活性 二、文献综述 前言 随着人类生活水平的提高，各种各样的疾病也随之出现，近年来癌症的发病率越来越高，成为威胁人类健康的一大重要疾病。

医药学者为了攻克癌症作出了各种努力，近来制备单克隆抗体成为一热门的研究方向。

研究发现CD20分子在癌症细胞表面大量表达，而在正常细胞上表达量较低，根据这个特点，科研学者利用CD20作为靶点设计抗CD20的抗体从而靶向杀伤癌细胞，可单克隆抗体单独使用效能较低，且有些癌细胞逐渐产生抗性。

MMAE是一种合成的Dolastatin 10类似物，可以抑制微管蛋白的形成，从而阻止细胞的有丝分裂，对于肿瘤细胞可以抑制其增殖从而达到良好的抗肿瘤效果，但是此药不具有靶向性，对正常细胞也具有很大的杀伤力，如今我们考虑到可以将抗CD20抗体与MMAE相偶联起来，利用单抗的靶向性将药物特异性运输到肿瘤细胞，之后肿瘤细胞将之内吞，在细胞内，MMAE再起到杀伤肿瘤细胞的作用，这样不仅实现了靶向杀伤，而且提高了杀伤效率，对肿瘤细胞的抑制作用增强。

对于偶联的方式，现在主要是使用化学方法，但是化学方法精确性不高，反应特异性不强，生成的产物不均一，而现在我们利用酶来催化偶联。

Sortase A是一种特异性催化LPETG和GGG形成LPETGGG产物的酶，因此我们可以在单抗的末端加上LPETG，在MMAE末端加上GGG，这样就可以通过Sortase A来催化二者偶联，不仅可以提高反应效率，同时也能提高反应的特异性与精确性。

正文目前单克隆抗体在临床癌症治疗中显示出很高的效率，如现在利用利妥昔单抗治疗非Hodgkin淋巴瘤，赫塞汀治疗转移性乳腺癌。

随着单抗的使用，现在出现了这样一种研究浪潮，即将单抗作为一种运输载体把有毒药物靶向运输到癌细胞，这种方法不仅可以通过靶向运输提高药物的活性，同时也能够使正常组织免受伤害。

cAC10是一种嵌合型抗CD30的单抗，在体外能够阻止CD30 细胞的增殖并且显示出体内的抗肿瘤活性。

有文献报道cAC10与MMAE通过缬氨酸-瓜氨酸连接臂相连接后，它的抗肿瘤活性明显增高。