LC-MS/MS检测人血浆中JSPH1902分析方法的建立文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、研究背景和发展趋势

非小细胞肺癌（NSCLC）是造成全球癌症死亡的重要原因之一，以铂为基础的联合化疗，直到几年前仍是晚期癌症患者治疗的唯一选择，但是其效果有限，总体生存率(OS)lt;12个月，5年生存率lt;1%。近几年来，表皮生长因子受体信号通路（EGFR）的发现使得晚期NSCLC患者的治疗几率有了革命性的提高。

EGFR是一种配体诱导激活的酪氨酸激酶受体，能够激活细胞内下游信号通路，从而促进细胞分裂增殖。EGFR活性突变(AMs)是非小细胞肺癌的常见驱动基因，导致EGFR即使在缺失配体的情况下也处于激活状态，使得下游信号通路持续处于超活化状态，引起细胞的恶性增殖(肿瘤)，因此，抑制不正常的EGFR信号通路，是治疗肿瘤的策略之一。

第一代EGFR抑制剂，如吉非替尼和埃罗替尼，临床上约有70%的患者有明显药物应答反应，表现为肿瘤明显缩小，因此，EGFR是一个非常有效的作用靶点，但在10-16个月的治疗后，会产生耐药性，有近2/3的患者产生了二次获得性变异T790M (EGFR受体蛋白中的一个苏氨酸变异为蛋氨酸)，研究发现突变位置处于结合位点的“入口处”，使得吉非替尼与受体相互作用减弱，产生耐药性问题。大多数的耐药机制是EGFR-TKI依赖性耐药机制，但是也有少数非EGFR依赖性耐药，比如各种各样的旁路耐药机制。

通过分析上述产生耐药性的原因，药物化学家们在吉非替尼、埃罗替尼的基础上开发出了新一代的EGFR抑制剂， 也称之为第二代EGFR-TKI。与第一代所不同的是，第二代化合物大多数采用了不可逆的共价键结合形式，比较成功典例如阿法替尼、达克替尼，被FDA批准用于双突变的非小细胞肺癌治疗。虽然上述药物能够克服耐药性问题，但是此类化合物也能对野生型的EGFR产生效用，存在较为严重的剂量依赖性副作用，如皮疹和腹泻，因此大大限制了其临床应用。在第一代和第二代EGFR-TKI的基础上，人们一直在努力探索新的化合物，即选择性与双突变以及单突变后的EFGR结合，而不影响野生型EGFR。

随后，药物化学家分析双突变蛋白的结构，发现位于结合位点入口处的残基由苏氨酸变异为蛋氨酸，这两个残基的疏水性存在差异，蛋氨酸亲脂性较苏氨酸更强。因此，如果调整小分子化合物的疏水性，就能选择性的抑制双突变EGFR，而对野生型EGFR无影响。

因此通过筛选得到含有吲哚基团的化合物，表现出很好的化学活性，但是该化合物在细胞测试中活性降低了近90倍，分析其原因，可采用不可逆的共价键结合方式，提高化合物与酶的结合能力，而不改变其活性。分子对接分析化合物与双突变EGFR蛋白的相互作用关系，发现结构中嘧啶环与甲硫氨酸残基M793形成氢键，氯原子指向结合位点入口处的甲硫氨酸残基M790，苯胺的间位则指向半胱氨酸残基C797。因为半胱氨酸的巯基是进行共价结合药物设计的理想结合部位，经过比对，优先对苯胺间位优化，选用丙烯酰胺，苯胺的邻位取代，甲氧基活性增强，选择性减弱。

由于化合物亲脂性太强，后期开发较为困难。因此替换顶部取代基的吲哚，使得选择性大大提高，亲脂性得到改善。丙烯酰胺部分引入碱性基团，如二甲氨基，亲脂性改善。对于嘧啶环5位的修饰，可以选用甲基、氢原子以及氯原子，氯原子对于提高选择性，改善亲脂性很重要，能够与甲硫氨酸残基更好的相互作用，因此选择化合物。

为进一步提高活性及选择性，苯胺对位可以取代哌嗪，顶部取代进行优化，活性和选择性明显提高。随后哌嗪基团修饰有三种方式：哌嗪酰胺化、开环及环系大小的置换，进行相关副作用评估以及药代动力学测试时，发现AZD9291表现更好，在后续的动物试验中也表现更佳，因此选择化合物AZD9291作为备选药物，进入到下一阶段的临床试验研究。