高效液相色谱法测定阿伐那非的含量文献综述

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ED已为困扰全球男性的重要疾病之一，全球范围内约1.5亿男性患者有不同程度ED。AFNF为日本田边三菱制药授权美国Vivus（NASDAQ：VVUS）开发的用于治疗ED药物，Vivus获得美国和欧洲市场的授权，2012 年 4 月美国 FDA 批准AFNF片剂上市，商品名Stendra。^[1]

AFNF与伟哥和希爱力属于同一类药品，均属于5型磷酸二酯酶抑制剂（PDE5-I），而AFNF一种可能起效更快的伟哥和其他勃起功能障碍（ED）治疗药物的替代药物，也为勃起功能障碍药再添新成员。AFNF不能用于同时服用硝酸盐类治疗胸痛的男性患者，其与部分降压药物合用存有禁忌。该药目前尚未在国内上市，具有市场潜力。

AFNF作为新型药物，就目前昆药集团现有的生产设备、环境条件，及检测设备和技术能力，均能满足AFNF原料及制剂的生产和质量控制，且其原料及制剂的工艺制备方法易得，操作简便，成本低，收率高，有利于工业化生产和市场的推广、销售。

本文结合公司在研究项目的需求，建立一种快速、准确的高效液相色谱法对AFNF质控重点、核心指标有关物质及含量进行定性和定量控制方法，且依照现行的法规^[2]要求对所建检测法进行线性、专属性、准确性、精密性、重现性等各相应方面的验证试验，以确保所建方法的准确、专属、可控。从而有效地控制原料药的品质，利于制备质量合格的制剂产品。

虽该药物目前处于研究阶段，尚未投入生产。本文建立AFNF 定性、定量指标的检测方法，将为今后产品的生产质控奠定良好基础，并具有实质性的指导意义。

研究的方法及预期目的：

一、研究的方法

结合AFNF的特性，建立快速、准确的高效液相色谱法，对AFNF进行有关

物质和含量指标的定性和定量检测。

二、预期目的

1、仪器、试药

仪器：高效液相色谱仪、分析天平等。 试药：均由昆明制药集团提供

2、色谱条件的摸索、优化及确立

通过摸索试验、优化，确立最适合本品有关物质和含量检测的色谱系统适用性试验条件。

3、检测方法的验证试验

依照现行的法规《中国药典》（2010年版）二部附录要求，对所建检测法进行线性、专属性、准确性、精密性、重现性等各相应项目验证试验。

4、预期目的：通过方法的建立、分析方法的验证试验，确保所建方法的有效、准确和可行。

研究进度：

结合实习期的时限，合理安排课题的进度如下：

文献综述：

AFNF综述

【摘要】目的：AFNF是一种口服的高效选择性磷酸二酯酶抑制剂，用于治疗勃起功能障碍（ED）。目前有关AFNF的报道较少，本文简单介绍了AFNF的作用机理，AFNF合成方法研究进展，AFNF临床效果，并对其市场前景进行展望。

AFNF(Avanafil)是美国 Vivus 公司从日本 Tanabe Seiyaku公司获得的一种口服速效的高选择性磷酸二酯酶-5(PDE5) 抑制剂，2012 年 4 月美国 FDA 批准AFNF片剂上市^[1]。AFNF为白色结晶性粉末，其化学名称为(S)-4-[(3-氯-4-甲氧基苄基)氨基]-2-[2-(羟甲基)-1-吡咯烷基]-N-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲磺酰胺，分子式：C₂₃H₂₆ClN₇O₃，分子量：483.95，化学结构

式：

FDA 批准AFNF的适应症为治疗勃起功能障碍(ED)，ED患者可在进行性行为之前 30 min 根据需要服用该药。对大多数患者，开始剂量是 100 mg，在性活动前约 30 min 服用。AFNF目前在国内尚未上市，根据美国 Vivus 公司公开的资料，以下对本品的各个方面作一综述。

1.药理学研究^[2]

阴茎勃起的生理机制涉及性刺激过程中阴茎海绵体释放一氧化氮，而一氧化氮能激活鸟苷酸环化酶，提高cGMP水平，进而使海绵体平滑肌舒张，使血液流入。AFNF对离体人海绵体无直接松弛作用，但可通过提高一氧化氮含量抑制负责降解海绵体中cGMP含量的磷酸二酯酶-5（PDE5）。因为性刺激是一氧化氮局部释放的必要条件，因此在没有性刺激的条件下，对PED5的抑制是不产生作用的。

体外研究表明，AFNF选择性的作用于 PDE5。它对于 PDE5的作用效果大于其他已知的磷酸二酯酶（比对PDE6的作用强100倍，比对PDE4、PDE8、PDE10的作用强1000倍，比对PDE2和PDE7的作用强5000倍，比对PDE1、PDE3、PDE9、PDE11的作用强10000倍）。PDE6存在于视网膜中，负责光传导，AFNF对 PDE5的作用比对PDE6 的作用强100倍。PDE5还存在于其他组织中，包括血小板、血管、内脏平滑肌、骨骼肌、大脑、心脏、肝脏、肺、胰腺、前列腺、膀胱、睾丸和精囊。AFNF对这些组织中PDE5的抑制作用是基于在体外增强NO抗血小板聚集活性和增强体内外周血管扩张作用。

2.药效学研究

2.1 AFNF对阴茎勃起反应的影响^[3]

一项单盲、安慰剂对照、单剂量的临床试验中，82名患者器质性和/或心因性勃起功能障碍的患者，在给予AFNF后进行视觉性刺激，所评估的客观硬度和勃起持续时间与安慰剂相比显著改善。给药后100至120分钟内每隔20至40分钟进行评估。

2.2 AFNF对血压的影响^[4]

健康男性志愿者给予单次口服剂量AFNF（200mg）后1h，收缩压/舒张压从基线的平均变化为-5.3/-3.7mmHg，安慰剂组收缩压/舒张压从基线的平均变化为2.7/-0.4mmHg。给药一小时后，AFNF200mg剂量组的收缩压/舒张压比安慰剂组降低8.0/3.3mmHg。

2.3对心脏电生理的影响^[5]

一项随机、双盲、安慰剂、活性药物(莫西沙星)对照的交叉研究评价了AFNF单剂量100 mg或800 mg对52名18~45岁健康男性受试者 QT 间期的影响。100 mg 剂量无显著影响。阿伐那非800 mg 剂量组的平均 QT间期(Fridericia 校正的QT间期)，相对于安慰剂组为 9.4毫秒(双侧 90 %置信区间=7.2，11.6)。健康男性受试者给予AFNF(100 mg和800 mg)后全面的 QT/QT 间期试验表明，AFNF并未导致 QT 间期或心室复极的任何显著的变化。

2.4AFNF与硝酸酯类药物联合用药时对血压的影响。

在临床药理学试验中，AFNF200mg单剂量表现出与硝酸酯类类似的降压作用。使用任何剂型的硝酸酯类的患者禁忌使用AFNF。

一项评估AFNF和硝酸甘油之间作用程度的试验表明，服用AFNF后出现紧急情况应服用硝酸甘油。一项单中心、双盲、随机的三交叉实验中，受试者为30至60岁的健康男性。受试者按照试验药物和硝酸甘油之间的给药间隔分为 5个试验组。受试者依次被分配到各试验组，上一个试验组血液动力学结果中的严重不良事件(SAE)进行审查后，才能开始下一个试验组的治疗。每个受试者均按随机顺序服用3种药物(AFNF 200mg，枸橼酸西地那非 100mg和安慰剂)。受试者在给予试验药物后按预先规定的时间点(0.5、1、4、8 或12 h)含服硝酸甘油(NTG)0.4 mg。总体而言，14 例给予安慰剂的受试者(15%)和28例给予AFNF的受试者(28 %)，在硝酸甘油给药后临床表现为站立收缩压显著下降，即站立收缩压下降大于或等于30mmHg。与其他PDE5抑制剂类似，AFNF与硝酸酯类合用是禁忌。已经给予AFNF的患者，如生命垂危必须给予硝酸甘油，应至少在最后一次给予AFNF12 h后给予硝酸甘油。这种情况下，仍然需要医护人员指导下服用，并进行血液动力学监测。

2.5 AFNF与酒精同时用药时对血压的影响

一项临床药理学试验评价了AFNF和酒精的相互作用。AFNF以200 mg 剂量给药，同时给予酒精0.5 g/kg。经证实血液酒精含量为0.057%。无体位性低血压或头晕的报告。与单独给予酒精相比，AFNF与酒精同时用药时可观察到仰卧位收缩压/舒张压额外下降最大值为 3.5/4.5 mmHg，脉搏频率额外增加最大值为9.3 bpm。AFNF并未影响血液酒精浓度。

2.6 AFNF对精液的影响^[6]

在一组健康男性受试者中，AFNF单剂量200 mg 未对对精子活力和精子形态产生急性毒性影响。

2.7 AFNF对视力的影响

单次口服磷酸二酯酶 5 抑制剂可使颜色辨别能力(蓝/绿)产生短暂的降低，采用法恩斯沃思-孟塞尔 100色度测试发现，这种降低是与剂量相关的，在血浆浓度达峰值的时间影响最大。这一发现与PDE6对视网膜光传导的抑制作用相一致。

3.合成研究^[7]

文献报道的AFNF合成路线是以甲基硫脲（1）和乙氧亚甲基丙二酸二乙酯（2）为起始原料经环合得到4-羟基-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯（3），化合物3用三氯氧磷氯化得到4-氯-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯（4），4与3-氯-4-甲氧基苄胺（5）发生亲核取代得到4-（3-氯-4-甲氧基苄胺基）-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯（6），6用间氯过氧苯甲酸氧化得到4-（3-氯-4-甲氧基苄胺基）-2-甲磺基嘧啶-5-羧酸乙酯（7），7与（S）-2-羟甲基吡咯烷（8）发生亲核加成、水解后与2-嘧啶乙胺缩合得到AFNF，合成路线如下所示。

AFNF合成工艺制备方法原料易得，操作简便，成本低，收率高，利于工业化生产。

4.临床应用

4.1适应证和用途

AFNF是一种磷酸二酯酶5型抑制剂适用于治疗勃起障碍。

4.2剂量和给药方法

4.2.1对大多数患者，开始剂量是100mg，在性活动前约30分钟服用。

4.2.2服用AFNF片一天不超过一次。

4.2.3根据疗效和/或耐受性剂量可增加至200mg或减低至50mg。试验提供疗效的最低剂量。

4.2.4AFNF片可与食物或不与食物服用。

4.2.4在用稳定alpha;-阻断剂治疗患者，推荐的起始剂量是50mg

4.3不良反应

AFNF最常见不良反应包括头痛，面部和身体其他部分的潮红，鼻充血，常见的感冒样症状（鼻咽炎）和后背痛。罕见有服用AFNF或其他PDE5的患者出现阴茎异常勃起可能持续4小时或更长时间。如果这一情况出现，患者应及时就医。AFNF与其他的PDE5抑制剂相比，副作用更少，选择性更高，起效更快，有极好的总体功效和满意的副作用。

5.质量控制方面

目前国内对PDE5抑制剂类分析及检测方面的文献报道居多，而对AFNF质量控制方面专题文献报道较少。

6.总结

ED已成为困扰全球男性的重要疾病之一，全球范围内约1.5亿男性患者有不同程度ED。作为新上市的高选择性PDE5抑制剂，AFNF药理药效学研究结果显示，AFNF能选择性地作用于磷酸二酯酶5，对阴茎勃起反应有显著改善作用，且起效时间短。与其他PDE5抑制剂一样，AFNF与部分降压药物合用是禁忌。AFNF合成工艺制备方法原料易得，操作简便，成本低，收率高，利于工业化生产，因此，AFNF作为新型药物，将具有很好的市场前景。

参考文献

［1］刘文中，何广卫，崔进.ED治疗新药AFNF药理毒理研究综述［J］.广东化工，2014,41（17）：109-110.

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［7］田红潮，毛璞，肖咏梅，等.AFNF的合成研究进展［J］.山东化工，2015,44（9）：58-61.