MYH9ECKO小鼠对LPS气管滴注诱导的急性肺损伤药效学评价文献综述

开题报告

一、研究目的

急性肺损伤（Acute lung injury, ALI）及其最严重阶段急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome, ARDS）是由肺内外各种致病因素引起的，以急性、进行性呼吸衰竭，顽固性低氧血症，并伴有两侧肺弥漫性浸润为特征的临床综合征。其发病率和死亡率逐年升高，尚无有效的治疗手段。因此，寻找有效的防治ALI的靶点和药物是危重病医学研究的热点和难点。本课题以临床防治ALI确切的中药麦冬的有效成分鲁斯可皂苷元为探针识别的功能蛋白NMMHC ⅡA出发，从急性肺损伤的关键病理特征入手，探讨NMMHC ⅡA 在LPS诱导的肺血管内皮屏障损伤中的作用及其可能的调节机制，以期为丰富急性肺损伤的病理机制提供参考依据，也为临床防治 ALI 药物开发提供新的线索和思路借鉴，并为阐释中药麦冬改善ALI的分子机制提供新的实验证据。

二、拟研究或解决的问题

1、体内：正常及MYH9^ECKO（NMMHC ⅡA内皮条件性敲除）小鼠在LPS诱导ALI后肺内皮屏障功能以及肺损伤相关指标变化；

2、体外：正常及MYH9^ECKO小鼠肺原代内皮细胞在LPS诱导后细胞通透性及相关信号通路蛋白表达变化。

三、研究手段及内容

1、通过查阅文献和总结课题组前期实验情况，选择并优化NMMHC ⅡA内皮细胞特异性敲除小鼠的构建和基因表型鉴定以及各项体内外实验方法；

2、实验对象的构建及NMMHC IIA敲除效率鉴定：通过腹腔注射他莫昔芬（150mg/kg）诱导小鼠NMMHC ⅡA内皮特异性敲除后采取PCR扩增及DNA凝胶电泳法鉴定敲除小鼠基因表型；通过组织免疫荧光及MYH9^ECKO小鼠肺原代内皮细胞WB法鉴定NMMHC IIA敲除率；

3、体内实验：拟采用尾静脉注射伊文思蓝法观察正常及MYH9^ECKO小鼠在LPS诱导ALI后肺血管内皮通透性变化；肺组织、血浆中MPO含量测定及肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量测定；