肢体后适应减轻脑缺血再灌注损伤的实验探讨文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

背景介绍:

缺血性脑中风是一种患病率、死亡率、致死率以及复发率均相当高的脑血管疾病。脑缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury，IRI）是指脑缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，脑缺血再灌注损伤与自由基的生成，细胞内钙超载，兴奋性氨基酸毒性，白细胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有关。

肢体后适应（limb remote ischemic postconditioning，LRIP）指在脑缺血后进行短暂的肢体缺血。据研究报道，脑缺血发生后进行肢体缺血后适应能发挥脑保护作用，也可提高小鼠的脑缺血耐受，减轻脑缺血引起的神经功能性障碍。在临床上可诱导缺血性脑中风内源性脑保护作用，但其机制尚不明确。

研究内容：

查阅LRIP、脑缺血再灌注（IR）以及中性粒细胞与IR关系的相关文献，并整理书写课题相关的综述。采用体重在20-30 g的健康小鼠，制备稳定有效的小鼠MCAO模型。将小鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（MCAO）及LRIP组（Sham组不予缺血其它操作同MCAO组，LRIP组在MCAO组的基础上添加肢体缺血后适应操作），再灌注24小时后，进行行为学评分以及脑梗死检测，评价LRIP对脑IR损伤的作用并初步探讨相关机制。详细记录实验数据，书写学士学位论文。

研究手段：

1. MCAO模型组的建立:：小鼠脑缺血再灌注模型建立使用改良线栓法：首先使用4%水合氯醛进行腹腔注射麻醉，剃颈部毛（剃干净且不能有伤口），将右颈总动脉与迷走神经拨开，打活结，进行结扎往上分离颈内动脉及颈外动脉后 ，对颈外动处理，打两个死结，在颈内动脉上打活节，用胰岛素针刺穿颈外动脉上两个死结中间用线栓插入，待线栓插入后，用剪刀剪断两个死结中间血管，让颈内动脉与颈外动脉形成一条直线，将线栓插入颈内，当线栓进入深度距离9-10 mm时感到阻力，用预留于颈内动脉的活结固定线栓，结扎颈外动脉，松开颈总动脉的活结。缺血1 h后，拔栓，结扎颈内动脉近颅端，缝合小鼠颈部皮肤，并且用碘伏消毒伤口，手术结束，将小鼠放在25°C保温毯上，小鼠苏醒后放入饲养笼中。

2. 24 h后，进行小鼠神经行为学评分(NSS)：测试内容包括：身体对称，步态，转圈行为，攀爬行为，前肢对称，强迫转圈，分数均从0-4分给出，计算总分值。测定小鼠脑梗死体积比；给予腹腔注射4%水合氯醛，麻醉成功后吸取5-6 mL生理盐水灌流心脏，取脑，从前往后作冠状位连续切片，厚度为2 mm。将鼠脑切片浸泡于1%TTC染色液中，37 °C恒温避光20 min，每5 min翻转一次，正常脑组织染为红色，梗死区域组织为白色，将脑片浸泡于4%甲醛PBS溶液固定一段时间

3. 肢体后适应：取MCAO模型小鼠，将其用4%水合氯醛麻醉后，使其双腿腿缺血5 min，后恢复供血5 min，进行3次循环，结束后将小鼠放在25℃保温毯上，小鼠苏醒后放入饲养笼内。