汉黄芩素抑制K562细胞增殖并引起周期阻滞文献综述

课题依据：

K562细胞是从慢性粒细胞白血病患者（急变期）中分离建立的一株分化极差、恶性程度较高的白血病细胞株，在体外可被多种诱导剂诱导，并向红系终末分化，是体外研究肿瘤细胞恶性表达调控以及细胞增殖分化的良好模型。

汉黄芩素是从中药黄芩中分离得到的一种重要的黄酮多酚类化合物，在植物体内多以游离态或与糖结合成苷的形式存在。大量研究表明，该类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗变态反应、抗炎、抗病毒等多种生物活性及药理作用。对人类的肿瘤、衰老、心血管等疾病的治疗和预防也具有重要意义。其抗肿瘤作用机制概括主要有：①影响花生四烯酸系统代谢途径；②抑制细胞增殖，使细胞周期阻滞；③诱导肿瘤细胞凋亡；④抗肿瘤新生血管生成等。

有文献显示，汉黄芩素对人肺鳞癌QG56细胞、肝癌HepG-2细胞、胶质瘤U251细胞等多种细胞都有生长增殖抑制并诱导凋亡的作用。也有研究证实汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞有明显的生长抑制作用，且呈剂量依赖性。另外，汉黄芩素明显抑制了SPC-A-1集落形成能力，提示汉黄芩素能抑制细胞的持续增殖能力。在血液系统方面研究中，张萌等研究表明汉黄芩素在有效浓度时能明显抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖，抑制细胞的有丝分裂。其可能影响Akt／Wee1信号通路使肿瘤细胞发生G2/M期阻滞从而发挥增殖抑制作用。除此之外，有外文文献还报道汉黄芩素类似物黄芩苷能通过激活p21、p27，裂解激活PARP，诱导人髓系白血病细胞株HL-60细胞凋亡，并阻滞细胞于G0/G1期而抑制HL-60细胞的增殖。本课题以K562细胞作为研究对象，观察汉黄岑素的抗白血病作用，探讨其抑制细胞增殖的可能途径及分子机制，为今后在白血病治疗中的应用及研发抗慢性粒细胞白血病药物提供理论和实验依据。

拟解决的问题：

1、汉黄芩素对K562细胞活力的影响

本实验通过MTT实验研究汉黄芩素对K562细胞活力的影响。MTT法又称MTT比色法（四甲基偶氮唑蓝比色法），是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法灵敏度高、经济实用，已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定。

应注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0.8-1.2范围内。

2、检测汉黄芩素的对K562细胞增殖能力的影响