基于HSP65的糖尿病疫苗的分离纯化文献综述

1. 研究背景Hsp65（Heat shock protein 65kD）是来自于卡介苗（减毒活结核菌）BCG (Bacillus Calmette-Gurin, Mycobacterium tuberculosis var. bovis)的热休克蛋白（MT- Hsp65），是卡介苗的主要抗原之一。

由于热休克蛋白高度保守，人的热休克蛋白Hsp60是胰岛细胞的主要自身抗原之一，和结核分枝杆菌的Hsp65具有大约50%的同源性。

因此HSP-65作为安全合适的载体应用于糖尿病疫苗P277及IA-2-P2中形成融合蛋白在体内表达。

但是Hsp65由于具有蛋白酶的催化活性，当细菌裂解后，Hsp65很容易被自身蛋白酶活性所分解。

本课题已成功在Hsp65的C端通过柔性接头连接了6P277、IA-2-P2，再在融合蛋白HSP65-6P277及IA-2-P2的N端添加组氨酸标签，最后通过培养工程菌，采用镍柱亲和层析分离纯化糖尿病疫苗，减少蛋白纯化步骤，提高蛋白产率。

2.拟研究的目的 1） 优化对融合蛋白HIS-HSP65-6P277及HIS-HSP65-6（IA-2-P2）糖尿病疫苗进行分离纯化的方法。

2） 摸索以Hsp65为载体的融合蛋白，Hsp65最低降解的系统性条件。

3．拟采取的研究方案本课题就是将实验室前期构建的HIS-HSP65-6P277及HIS-HSP65-6(IA-2-P2)重组菌，在含卡那霉素的液体LB培养基中培养，测其生长曲线，并进行乳糖诱导表达。

超声裂解菌体，用金属离子亲和色谱镍柱或进一步用DEAE-52纯化，SDS-PAGE电泳检测其纯化结果，最后透析冻干。