CRISPR/Cas系统真核编辑中的稳转单细胞株的筛选验证文献综述

一、研究背景及研究目的：CRISPR-Cas（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR associated）系统是在细菌和古细菌中发现的一种由RNA介导抵抗外源核酸入侵的适应性免疫系统，主要由一种或几种Cas蛋白和CRISPR基因座组成。

以Cas9为代表的Class 2类CRISPR-Cas系统由于其组成简单，机制研究透彻，已经成为基础和应用生物学研究中普遍选择的基因编辑工具，而在自然界分布中，Class 1类系统占整个CRISPR-Cas系统的90%，从进化角度看可能拥有更加精密和高效的机制来靶向抵抗外源DNA的入侵，即可能会成为效果更佳的基因编辑工具，例如在长片段敲除、长片段定点插入以及优化基因组大小、筛选基因功能等方面，Class 1类系统具有更有效的应用前景。

本课题拟利用新发现的1类CRISPR亚型系统，在真核细胞进行Green GFP基因编辑，观察其编辑效率，以及探究该系统对长片段基因的敲除机制。

二、拟研究的问题：1、探究新发现的1类CRISPR亚型系统其基因敲除的机制。

2、观察该系统对于靶标基因的切割效率。

三、文献综述：CRISPR／Cas系统概述及分类CRISPR／Cas系统是原核生物用来抵御外源核酸入侵的重要的免疫途径。

它广泛存在于细菌和古菌中[1]，可以将入侵的病毒和质粒片段整合到自身的染色质中形成CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeat成簇规律间隔短回文序列)序列矩阵。

此后如有携带相同基因的病毒或质粒入侵时，这些 CRISPR基因将被转录成pre-crRNA。

Pre-crRNA经过Cas蛋白加工后，成为成熟的crRNA(CRISPR RNA),它与相关Cas蛋白组装形成了效应复合物，展开以crRNA为导向的免疫活动。