血源扩增Taq酶的研究与应用文献综述

一．课题背景简介

Taq酶即Taq DNA聚合酶，提取自一种耐热菌，该菌发现于美国国家黄石公园的热泉中。其最大的特点就是高温下不失活，彻底的改变了利用Klenow酶PCR时每次循环需要加酶的程序。大大简化了PCR流程，使PCR技术能够广泛地应用于各个相关领域。Taq DNA聚合酶是重要的生物技术工具酶，广泛应用于疾病诊断与治疗、传染病检测、药物作用机理等医药领域。

Taq DNA聚合酶在结构上由三部分构成：DNA聚合酶区、3核酸外切酶区和5核酸外切酶区。由于3核酸外切酶区的氨基酸序列的变化而使其失去了3-5＇的外切校读功能，因此Taq DNA聚合酶有错误复制倾向。利用特定位点的突变、与其他酶互换功能区和删除N末端的5核酸外切酶区等方式可以改进Taq DNA聚合酶的性能，使它的忠实性、热稳定性和聚合性能得到提高。

血源扩增Taq酶（Hemo Klen Taq） 是截短后的 Taq DNA 聚合酶，它缺失了 N 端的 280 个氨基酸（ 1 ）。 Hemo Klen Taq 还有其它突变，这些突变使它能够耐受全血中存在的抑制剂，扩增人和小鼠全血样品中的 DNA而无需事先提纯，简化了实验步骤，加快了实验过程，降低了污染的风险。

血源扩增Taq酶的来源：有突变的 Taq DNA 聚合酶基因的 E. coli 菌株，此蛋白缺失了 N 端的 5 → 3 外切酶结构域，其基因内部发生了三个点突变。Hemo KlenTaq 在 25 mu;l 的反应体系中能够耐受高达 10% 的全血（ 50 mu;l 反应体系中耐受 20% ）。

使用 Hemo Taq 扩增人全血。

M 1 2 3 4 M 5 6 M

1,2：10%血液 EDTA-Na