HER2蛋白表达（IHC）与基因扩增（FISH）检测结果一致性的比对及临床意义分析文献综述

HER2蛋白表达（IHC）与基因扩增（FISH）检测结果一致性的比对及临床意义分析一、拟研究或解决的问题1.应用免疫组织化学法（IHC）检测HER-2蛋白表达情况。

2.应用荧光原位杂交法（FISH）检测HER-2基因扩增情况。

3.对免疫组织化学法（IHC）和荧光原位杂交法（FISH）检测结果进行一致性对比，分析其临床意义，并明确实验室进行HER-2检测结果对用药的具体指导意义。

二、采用的研究手段1.检测方法1.1.样本处理选取乳腺癌组织样本，样本经10%福尔马林溶液固定，依次经50%、75%、85%、95%、100%酒精、二甲苯脱水处理，用石蜡进行包埋，切片厚度为3mu;m。

1.2.IHC检测切片57℃烘箱过夜，第2天上机Roche Ventana Benchmark ULTRA全自动免疫组化仪进行检测，进行程序如下。

脱蜡：EZ Prep 76 ℃作用4min，反应缓冲液（Reaction Buffer，RB）冲洗；抗原修复：pH8.0~8.5 免疫组化抗原修复缓冲液（CC1）100 ℃作用15min,RB冲洗；封闭：3%过氧化氢37℃作用4min封闭内源性抗原，RB冲洗；一抗：37℃作用12min，RB冲洗；二抗：辣根过氧化物酶（HRP）37℃作用8min，RB冲洗；DAB显色：DAB 37℃作用8min，RB冲洗；强化：Copper 37 ℃作用4 min，RB冲洗；苏木素衬染：苏木素37 ℃作用8 min，RB 冲洗；返蓝：返蓝液37 ℃作用8 min，RB冲洗。

取染色完成的玻片，用含清洁剂的清水去除多余油质，常规梯度酒精脱水后，中性树胶封片。

在显微镜下观察着色、评分。

1.3.FISH检测切片65℃烘片1-2小时，置于二甲苯中浸泡两次，每次15min，100%酒精浸泡两次，每次5min，置于通风橱中晾干。